Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出口内自身免疫反应到显现出1DF乳癌外科征状的令人满意率在儿童时代就有很好的揭示，多个口内自身免疫反应非典型的儿童中会有70%在毒素转化后10年内患上乳癌，而随访15年的儿童这一分之一减低到84%。来得之下，占外科1DF乳癌一半以上的DF1DF乳癌的发病机制还很难给予充分的研究者。

越来越多的人开始用于分期系统来界定1DF乳癌的令人满意：生殖在显现出多种口内自身免疫反应时带入第1前期，显现出血糖总括度时带入第2前期，显现出征状时带入第3前期。一些多发口内自身免疫反应非典型的生殖，在1期和2期，令人满意速度慢，并发展为发病的1DF乳癌。我们之前揭示了三四组在首次监测到多种口内自身免疫反应检验后至少10年无乳癌的总括慢令人满意者，这四组病征人数少，但特征非常一致。随后，我们挖掘出口内自身免疫甲基化CD8+T蛋白反可不在令人满意总括快的病征中会基本不共存，但在近期发病和长期共存的乳癌病征中会很容易监测到。这不太可能表明，与令人满意病征来得，这些病征自身免疫反可不的平衡增强。

以前研究者表明，尽管平衡性T蛋白(Treg)数量正常，但乳癌病征共存一些新功能缺陷，其中会包括对IL-2的反可不能力减缓。此外，乳癌病征中会的效可不CD4+T蛋白不太可能对平衡更加具抵抗性，展现为效可不T蛋白的选择性减弱，自然归因于的Treg和本体外归因于的诱导Treg，以及免疫亲身经历的CD4+T蛋白中会IL-2反可不减弱。本研究者的目的是揭示了CD4+平衡性T蛋白(Treg)在一小群总括总括快令人满意者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的斜向研究者，在21岁以下肺炎的病征亲属中会检查1DF乳癌的危险诱因。我们之前揭示了长期总括快令人满意者的特征，他们始终保持多重口内自身免疫反应非典型有约10年，但很难显现出乳癌的外科征状，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续始终保持无乳癌并乐意提供大量肠道检验的总括快令人满意者纳入T和B蛋白新功能分析。在迄今为止的研究者中会，8名慢令人满意者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的口内自身免疫反应非典型。所有的参与者都始终保持稳定1DF乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫反应对某些免疫的非典型反可不，然而，一名病征已经始终保持稳定2期至少6年，但很难显现出外科征状，一名病征被病症为乳癌，该人脑72岁，在采自科学研究检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计学中会对该NAD展开了单独审核。受控外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多变量流式蛋白术和T蛋白选择性飞行测试审核NAD中会Treg的基频、表DF和新功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无监督聚类分析，审核Treg表DF。

结果：与生活品质NAD来得，来自慢令人满意本体的遗忘CD4+T蛋白的监督聚类说明了，激活的遗忘CD4+ Treg基频减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升高的病征与令人满意总括快者和归一化的对可不四组来得，Treg谱有所不同。新功能于数，与生活品质NAD来得，来自总括快令人满意本体的Treg细胞内的CD4+效可不T蛋白选择性明显损坏。展现为对效可不CD4+T蛋白CD25和CD134隐含的选择性减低。

示意图1 深入的表DF分析说明了，CD4+Treg亚DF在慢令人满意揭示符中会减低。由FlowSOM生成的Treg四楼，汇聚在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标明物隐含鉴定出10个元簇:遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个节点象征性一个坦克部队(100个坦克部队)，较小的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点四组周围上色。每个节点中会的饼示意图说明单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了整本体标明隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比原子量为每个metacluster装入线示意图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白(l)。紫色左上方象征性捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模DF证实，Treg基频的减低是令人满意总括快的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)更为SP参与者和归一化的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白上的歧异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的象征性性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含展开受控，精心设计FlowSOM族群。(b) HD(横纹)和SP(黑纹)四组以及NADSP 606(紫色)中会CD25+ cd127的基频核心内容示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的装入线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD揭示符间的不同。(j)装入线示意图说明了了在SP(黑纹)和HD(灰点)四组中会，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比原子量(分之一)。(k)数据集说明了每个簇的表DF(深蓝色)和Treg标明相比隐含与剧中隐含(深蓝色);上列，磁盘Treg_3;比如说一行，磁盘Treg_4。剧中与所有其他簇中会标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与生活品质献血者来得，令人满意总括快者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T蛋白元簇(遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个隐含标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)揭示符的隐含热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含串联，说明了数据集(c)和核心内容示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NAD包括，p< 0.05(深蓝色)NADSP 606和归一化的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)串联，说明了数据集(e)和核心内容示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自总括快令人满意的CD4+ treg蛋白控制效可不CD4+T蛋白的能力减缓。SP四组用深蓝色的线和左上方说明，HD四组用黑色的线和左上方说明，紫色的线/左上方说明NADsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按辨别的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白，人才3天后展开流式蛋白术监测。(a-d)与CD4+反之亦然者相比可不的treg人才(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。用于非典型对可不(激活的响可不蛋白不含treg)计算选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

示意图5 效可不CD4+T蛋白对总括快令人满意的T蛋白再造的选择性更加敏感。SP四组用深蓝色的线和左上方说明，HD四组用黑色的线和左上方说明，紫色的线/左上方说明NADsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按辨别的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白，人才3天后展开流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者都由人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得出的结论是，来自总括快令人满意子的再造遗忘CD4+Treg在GITR隐含中会给予了扩展和丰富，务实了再进一步研究者Treg在1DF乳癌风险生殖中会的一般而言的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28